小鼠模型,中洪博元,动物模型 中国实验动物信息网 2020-07-23 1553

　　1型（HSV-1）和2型（HSV-2）单纯疱疹病毒（HSV）感染是*常见的人类感染。单纯疱疹病毒通常引起经常复发的自限性口腔和生殖器大疱性溃疡。但是，HSV可以导致新生儿更严重的疾病和降低的免疫功能，并且是脑炎的常见原因。此外，HSV-2感染是HIV感染的重要危险因素。需要预防性和治疗性疫苗，因为*初的HSV感染会引起急性原发性疾病，然后可以通过潜伏性神经感染持续存在，并重新激活以产生复发性疾病或病毒。对于急性和复发性疾病以及复发性病毒脱落，都需要改良的抗病毒药物。 HSV预防性疫苗的*终目标是完全预防感染，但要实现这一目标是困难的。因此，限制HSV复制初始量并预防或*小化急性疾病的临床严重性的疫苗是一个合理的目标。针对感染HSV的患者的治疗性疫苗目标不仅可以减少复发性疾病的频率和严重程度，而且可以防止或减少有症状和无症状复发期间的复发性脱落。

　　小鼠模型：研究HSV的*常用模型是近交和近交小鼠模型。模型包括大脑，口腔，面部，角膜，鼻子，皮肤，新生儿和生殖器。老鼠相对便宜。这将有助于理解急性和持续性感染及再激活事件的分子生物学。小鼠模型的主要优点是可利用多种试剂来研究免疫和分子生物学反应。另外，敲除和敲入菌株可用于选择性评估基因活性和功能。生殖器感染的后果受小鼠的年龄，所使用的自交系，接种量和所使用的HSV系的影响。使用它们时，必须考虑这些变量。 HSV-2生殖器感染通常具有致命的后果，从而限制了这些研究的有效性。另外，小鼠的阴道感染需要使用甲氧基孕酮来同步发情周期，从而导致易感性增加以及对生殖器HSV-2疫苗的免疫反应降低。阴道接种后，动物患有带有红斑和肿胀的生殖器疾病，但与豚鼠相比，通常看不到离散的病灶，并且更难以评分。由于大多数动物在感染后都死于感染，因此无法评估潜在的感染，复发性疾病或复发病毒的脱落，但是胸苷激酶缺乏症（TK-）病毒是非致死性小鼠。请注意，您可以在模型中使用它。总之，小鼠模型是确定针对感染的局部和全身免疫反应，识别可能的保护性反应的*有价值的工具，并且是廉价的药品和疫苗早期筛选工具。

　　大鼠模型：致命的生殖器棉鼠模型也已经开发出来。服用甲羟孕酮后四天，棉鼠可以在阴道中感染HSV-1和HSV-2、该模型正用于评估临床试验中使用的gD疫苗。尽管两剂疫苗具有免疫原性，但它们未能预防HSV-2疾病或减少生殖器HSV-2复制。但是，与HSV-2生殖器疾病相比，该疫苗可以显着降低阴道HSV-1滴度并增加对HSV-1的抵抗力。由于这些发现与大型临床试验一致，因此对模型感兴趣。但是，应该注意的是，在棉鼠中进行的研究仅使用了两剂疫苗，而临床试验中则使用了三剂疫苗。

　　非人类的灵长类动物模型：另一个测试抗病毒剂，疫苗和杀真菌剂的模型是猴阴道HSV-2感染模型。该模型具有研究HSV-2感染与HIV之间相互作用的独特能力。类似于小鼠生殖器HSV模型，在阴道注射高剂量HSV-2之前4-5周，对动物进行了甲氧孕酮预处理。随后感染动物，但是在该模型中病变的发生率似乎较低。在一项研究中，仅10％的HSV-2猕猴患有宫颈炎症和/或病变。但是，在2年的随访中，大约50％的动物具有可检测到的HSV-2排泄并记录了感染。另一项研究发现了类似的发现。接种疫苗后的前7天，在生殖器分泌物中不断检测到感染性病毒和HSV-2 DNA，但存在感染的临床症状（病理变化或全身作用）。在HSV-2疫苗接种后第42和56天检测到生殖器拭子中的HSV-2 DNA，并且还记录了潜伏病毒的持久和自发激活。如在人类中所见，HSV-2感染也增加了阴道SIV-RT感染的频率。

　　豚鼠模型：HSV-2生殖器模型描述：HSV-2生殖器豚鼠模型的主要优点是受感染的动物会发展出易于量化的急性自限性疾病。有很容易发现的自发性复发。紫外线也可以引起复发性病变。此外，受感染的动物表现出反复的脱落，有无损伤。豚鼠感染的一个重要因素是模仿人类疾病。另一个优点是，动物可以评估急性和持续性神经感染的存在和数量，这与人类所能评估的不同。

　　操作：用预先弄湿的海藻酸钙棉签打开通常重量为200-300克的哈特利近交雌性豚鼠，打开阴道闭孔膜，然后将0.1毫升HSV-2直接滴入阴道去做。无需黄体酮的预先治疗。接下来，对由病毒在外生殖器皮肤上引起的病变进行评分。*常见的评分标准是0，无病，1 +，发红或肿胀，2 +，一些小囊泡，3 +，一些大囊泡和4+，一些大浸润。我有溃疡。另外，可以给具有中度严重伤害的动物赋予上述得分，即得分在0.5、1.5、2.5或3.5之间。皮肤稀疏地覆盖着会阴周围的细毛，被认为是外生殖器皮肤。严重程度通常在感染后5至7天达到峰值，然后逐渐下降。

　　在感染后的特定时间获取阴道拭子样本，以量化治疗对阴道病毒复制的影响。如果可能的话，也可以从临床上正常的外生殖器皮肤或外生殖器皮肤的病变中取样。通常从1-10天开始每天或隔天抽拭，因为急性病毒脱落通常在8-10天后结束。使用预先润湿的藻酸钙拭子取样，然后将拭子放入装有100 ml青霉素，50 mg链霉素，50 mg庆大霉素和2.5 mg两性霉素B的试管中。我会。 ，并保持冷冻。拭子样品的病毒载量可以通过噬斑测定或qPCR进行滴定。在急性疾病得到解决后，即在外阴病变愈合后，评估复发性病变和病毒性复发性复发。病变在第10-14天days愈，因此通常在第15天开始进行复发性疾病评估。每天检查动物是否复发。阴道拭子通常在第15天至第63至70天之间从阴道和生殖器的皮肤中取出，以检查病毒是否从阴道和生殖器的皮肤中脱落。观察到有或没有病变的反复脱落。脱落量可通过定量PCR定量以定量HSV DNA或通过培养以检测感染性病毒。在实验结束时，可以处死动物，并可以确定DRG和脊髓中潜在病毒载量的频率和定量。可以通过共同培养切碎的碎片以确定是否存在任何重新活化的病毒来确定潜伏期病毒。或者，可以通过qPCR定量以确定潜在的HSV DNA的量。当DRG的病毒滴度*高时，可以通过在感染后约3至8天杀死动物来衡量对DRG初始感染的治疗效果。功效：豚鼠是唯一可用于评估预防和治疗疫苗以及治疗急性和复发性疾病的小型动物。此外，如上所述，该模型允许评估这两种方法的几个关键病毒学和临床终点。预防性疫苗或急性疾病的治疗对早期阴道复制的影响将通过感染后7-10天的拭子采样进行评估。还评估了急性疾病的严重程度。干预可以阻止病毒的复制，至少降低从阴道中回收的病毒的滴度，或防止病变的发展。

　　从急性疾病中恢复后，您可以评估动物的复发性疾病，通常是一种单一的水疱或红色疾病。可以将其度量为不同时间段内的累积分数。由于病变的发生率随时间逐渐减少，因此正常的观察期是从急性期恢复后的7至8周，即15至64天或71天。同样，可以通过在观察动物复发性疾病期间收集阴道拭子来量化对病毒复发的影响。像人类一样，有或没有生殖器病变都可能出现辍学现象。我们认为这是评估疫苗和其他干预措施的重要终点，因为反复脱落是*重要的感染源。有效的疫苗或早期抗病毒干预措施会限制病毒在初始感染期间在DRG中的传播和复制，估计这种减少会影响随后的复发性疾病和复发性病毒传播.. 对于复发性疾病的治疗性疫苗或干预措施的评估相似。从急性疾病中恢复后，通常按指定的时间间隔对动物接种2-3次。复发时给予抗病毒药物可能会影响疾病的复发或病毒的脱落。因此，该程序与上述评估复发性疾病和复发性病毒脱落的程序相似。尽管有许多临床和病毒学方面的终点，但豚鼠复发性HSV疾病的模型受到复发次数和随时间推移复发辍学人数减少的限制。 结论：在许多HSV生殖器疾病的动物模型中，豚鼠与人类疾病*相似，在药物，生物制剂和疫苗的评估方面，与其他小动物模型相比，它们具有许多优势。 ..但是，此模型有一些局限性，可能导致较差的预测值。尚无法阐明*能预测人类试验成功的终点，但只能评估至少可以预防急性疾病，减少后续复发并评估潜在病毒载量的疫苗。已建议。只能开发可减少疾病复发并重复病毒脱落的治疗性疫苗。