动物实验,草本洁面乳 中国实验动物信息网 2020-09-03 664

　　背景：健康的洗面奶带有草药配方。洁面乳包含多种具有雄激素，解热，镇痛和抗炎潜力的药用植物提取物。我们正在使用雄性Wistar大鼠评估其安全性，并警告说BSC已被广泛使用且尚未得到美国食品和药物管理局（NAFDAC）的评估。遵循标准毒性指南，将BSC单胶囊（总量442 mg）溶于蒸馏水（80 mg/ml）中，并通过管饲法施用于大鼠。实验设计：口服急性毒性研究：圈养30只雄性Wistar小鼠（平均20 g），随机分为6组，并在给药前适应2周。口服BSC的浓度为250、500、1000、2000和4000mg/kg，并且允许动物自由进食。对照组口服0.1ml蒸馏水。给药后24小时内观察小鼠的死亡率和行为变化（多动，循环运动，后肢倾斜，饮食习惯增加，下颚刮擦等）。在给药后14天内进一步监测所有动物。急性腹部毒性研究：将30只雄性小鼠（平均20 g）放在不同的笼子里，随机分为5组。腹膜内给予200、400、800和1600 mg/kg的BSC剂量。对照组口服0.1ml蒸馏水。在给药后24小时内观察小鼠的死亡率，行为变化和毒性。 BSC为200 mg/kg的动物表现出躁动，攀爬，贪食症，后肢倾斜和圆周运动。 2小时后，给予高于400 mg/kg剂量的动物表现出躁动，虚弱，腹部扁平和撕裂的迹象。观察到体重减轻发生在大约6-10小时内，大多数动物都发抖。给药后24小时观察并记录每组动物的死亡率。给药后14天，进一步监测所有动物。中位数致死剂量根据芬尼法估算。亚慢性毒性研究：将32只体重150-300克的成年雄性Wistar大鼠分为4组，每组8只。*组，对照组，每天喝10毫升蒸馏水。第二、第三和第四组分别接受250 mg/kg，500 mg/kg和1000 mg/kg BSC。在实验期间，每周对大鼠称重。注意动物行为的变化。采集血液样本和组织以进行临床测试：实验组大鼠给药60天。*后一次给药后24小时内收集血液样本，并将其放入抗凝和非抗凝试管中。移开脖子处死动物。将抗凝剂的血液样品在4200pm下离心5分钟以分离血清进行生化分析。解剖肝脏，肾脏，心脏和大脑，称重并用4倍体积的缓冲液（0.1M，ph7.4）匀浆。一些器官将被取出进行组织学研究，而其他一些器官将被均质化以进行生化分析。

　　生化分析：肝和肾功能检查：通过测量血清天冬氨酸转氨酶（AST），丙氨酸转氨酶（ALT）和碱性磷酸酶（ALP）评估肝功能。测定血清肌酐（CREA）和血尿素氮（BUN）水平以评估肾功能。蛋白质和尿酸：为评估肝脏的合成功能，需要测量血清总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）的水平，并还要测量尿酸的水平。

　　血脂：使用试剂盒方法测定血清总胆固醇（TC）和甘油三酸酯（TG）。并测量血清中的高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL）。抗氧化和氧化应激：测量谷胱甘肽（GSH）水平和谷胱甘肽-S-转移酶（GST）活性。测量了超氧化物歧化酶（SOD）活性和过氧化氢酶活性。脂质过氧化通过测量形成的硫代巴比妥酸反应物来确定。 血液学评估：自动化血液学分析仪用于测量红细胞（PCV），血红蛋白（Hb），血小板（PLT）和总白细胞（TWBC）。

　　电解质：火焰光度计中钠离子（Na +），钾离子（K +），氯离子（Cl-），总钙离子（tca2 +），细胞内钙离子（钙）的含量我测量了组织学评估：采集肝，肾或心脏组织的样品，并通过固定，脱水，透明，穿透，包埋，切片和染色等方法进行组织学检查。为了确保良好的固定，将组织修整至大约5毫米的厚度，以实现良好的固定。将组织用10％甲醛溶液固定，并转移到50％（70％，80％，85％，95、100％）乙醇中2小时。石蜡组织随后被放在木块上，并按大小排列。旋转切片机用于连续切片，厚度为10μm。从每只动物的每个处理器官获得八个切片。染色后，DPX用作固定剂并进行显微镜检查。结果：急性口服毒性试验：表1显示了250、500、1000、2000、4000 mg/kg剂量的BSC的急性口服毒性试验的结果。动物没有以给定的剂量死亡。与对照组相比，在250 mg/kg剂量下未观察到毒性变化，但在500 mg/kg以上的剂量下，运动活性，轻度刮擦和给药后2小时内的轻度刮擦降低。我看到了划痕。过度活跃和虚弱。急性腹部毒性试验：表2显示了急性腹部毒性试验。我们观察到用BSC200、400、800和1600 mg/kg治疗的小鼠的死亡率或毒性变化。在200 mg/kg时，动物表现出躁动不安，登山，贪食症，后肢倾斜和圆周运动。给药后两小时，剂量为400 mg/kg的大鼠表现出躁动，虚弱，腹部扁平，流泪和浅呼吸的迹象。大多数动物在摇晃约6-10小时。平均致死剂量（LD50）为600 mg/kg。肝功能：表3显示，与对照组相比，治疗组的血清丙氨酸氨基转移酶（ALT），天冬氨酸氨基转移酶（AST）和碱性磷酸酶（ALP）没有明显变化。 （P\→ 0.05）。 250 mg/kg BSC分别降低了ALT和ALP水平。当服用250 mg/kg（32.4％），500 mg/kg（39.2％）和1000 mg/kg（51.4％）时，AST水平的剂量依赖性增加具有统计学显着性（P\0.05）。在500 mg/kg（41.4％）和1000 mg/kg（29.3％）剂量下，ALT水平显着增加（P\→ 0.05）。血脂：表4显示血清TG水平略有下降，分别下降11.6％，9.8％和1.5％。但是，*低剂量250 mg/kg可能会稍微增加血清TC水平。在250 mg/kg和500 mg/kg剂量下，血清低密度脂蛋白（LDL）分别下降14.7％和4.6％，而1000 mg/kg剂量使LDL稍微增加28.5％。肾功能，蛋白质合成和尿酸：分别以500 mg/kg和1000 mg/kg给药后，血尿素氮水平分别提高了11.8％（P \u003c0.05）和13.7％（P \u003c0.05）。服用250 mg/kg后肌酐水平增加7.1％。但是，血清白蛋白（ALB），总蛋白（TP）和UA没有明显变化。施用500 mg/kg和1000 mg/kg后，ALB，TP和UA的水平升高。血液学评估：服用250mg/kg（P \u003cu\→ 0.05）和500mg/kg（P \u003cu003c0.05）后，可以增加红细胞的数量。但是，与对照组相比，血红蛋白水平没有明显变化。 250 mg/kg可使白细胞计数增加62.6％，而500 mg/kg可使血小板计数增加50.6％。 电解质：口服250mg/kg？1000mg/kg不会引起钠离子的显着增加。钙含量在250 mg/kg时降低，而中，高剂量时钙含量增加。血清钾，氯和细胞内钙水平未改变。组织抗氧化剂：肝脏抗氧化剂：在低剂量（250mg/kg）和高剂量（1000mg/kg）下，肝脏GSH含量分别增加到68％和49.2％。与对照组相比，GST和超氧化物歧化酶之间无显着差异。但是，1000 mg/kg可使肝脏CAT水平增加54.1％。肾抗氧化剂：*高剂量（1000mg/kg）可增加肾GSH水平。所有剂量的肾GST水平均降低。仅*低剂量（250 mg/kg）显示增加CAT水平。 250mg/kg和500mg/kg可以增加肾脏的SOD水平。心脏抗氧化剂：在*高剂量（1000mg/kg）下，谷胱甘肽水平增加了9.7％，心脏GST水平下降了54％。 500mg/kg和1000mg/kg可以增加心脏中的CAT水平。大鼠心脏的SOD水平分别显着降低了30.1％（250 mg/kg），40.5％（500 mg/kg）和39.1％（1000 mg/kg）。脑抗氧化剂：脑组织中GSH水平的剂量依赖性增加分别为18.8％，96.4％和212.3％。 250 mg/kg降低大脑中的GST水平。 500mg/kg和1000mg/kg可以提高大脑中的CAT水平。所有治疗组的脑SOD水平均降低。

　　组织学评估：对照组（蒸馏水，10ml/kg）：对照组（蒸馏水，10ml/kg，A）和BSC（250mg/kg，B，500mg/kg，C）正常心脏已指示。但是，BSC（1000mg/kg，D）确实显示出心脏炎症。 BSC（250mg/kg）：对照组（蒸馏水，10ml/kg，E）和BSC（250mg/kg，F； 500mg/kg，G； 1000mg/kg，H）显示肾脏正常。 BSC（500mg/kg）：对照组（蒸馏水，10ml/kg，I）和BSC（250mg/kg，J，500mg/kg，K）显示肝脏正常。但是，BSC（1000 mg/kg，L）显示肝窦和中央静脉充血。

　　结论：使用Wistar大鼠等级，BSC被认为是相对安全的。由于肝脏和心脏的轻度变化，草药BSC被认为需要谨慎使用。