背景简介：

　　椎间盘退行性变是引起下腰痛的主要原因，它可引起一系列疾病，如腰椎间盘突出症、腰椎管狭窄症、节段性腰椎不稳和退变性腰椎侧凸等。细胞移植治疗是目前实验研究的治疗方法之一。

　　原代分离制备流程：

　　1、保定好新西兰大耳白兔，使用空气栓塞法处死兔子，浸入75%酒精消毒2-4min。

　　2、将新西兰大耳白兔置于无菌冰板上，解剖取俯卧位，使用75%酒精棉球擦拭皮肤，从背部入手取出兔胸腰段脊柱。

　　3、将取出的脊柱放于无菌的培养皿中，用含10%的双抗D-PBS液反复清洗数次，再使用无菌手术剪仔细剔除附着的组织。

　　4、使用锋利的无菌手术剪剪开椎间盘纤维环，曝露髓核。

　　3、使用无菌眼科斜镊取出胶冻状椎间盘髓核，置于装有D-PBS的培养皿中。

　　4、将取出的髓核组织剪碎至0.5-1mm3的小块。

　　5、适宜浓度的Ⅱ型胶原酶适量，37℃水浴震荡消化20min，期间用吸管轻轻吹打。

　　6、加入含20%的胎牛血清DMEM/F-12培养基终止消化。

　　7、2000r/min离心4-6min，弃上清，用含20%胎牛血清、1X双抗的DMEM/F-12培养基重悬沉淀。

　　8、将重悬液铺板。

　　9、放在37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱内培养。

　　10、原代分离的细胞预计在第六天后（具体时间视情况而定）首次换液，以后每2-4天更换培养基。

　　结果展示