动物实验,荧光定量PCR检测 中国实验动物信息网 2020-08-20 2066

　　目的：建立一种快速，灵敏，特异的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法，用于胆汁幽门螺杆菌的定量检测。

　　方法：PCR扩增H. bilis保守基因P17序列，全长ORF435bp，TA克隆，构建质粒标准pMD-HBP17。通过对pMD-HBP17标准品进行定量分析，优化了反应系统，以检测TaqMan探针用于实时荧光定量PCR的灵敏度，特异性和可重复性。通过建立的qPCR方法检测了77个临床样品，并与常规PCR进行了比较。比较测试结果。

　　结果：建立的qPCR检测方法显示出良好的线性和108至101个拷贝之间的质粒DNA浓度之间的相关性。所得标准曲线的斜率为-3.46、相关系数为0.999，检测灵敏度为20。副本中77个临床样品的检出率为14.3％，高于正常PCR的检出率（7.8％）。

　　结论：所建立的H.bilis qPCR检测方法具有高度特异性，灵敏性，稳定性，可用于定量和定性检测幽门螺杆菌。