动物造模 中国实验动物信息网 2022-06-09 1435

　　目的：观察Sjp40在感染新西兰白兔肝脏沉积虫卵及其肉芽肿病变形成中的表达情况，并进行免疫定位。

　　方法：日本血吸虫尾蚴感染新西兰白兔，收集未感染组、29 dpi组和45 dpi组肝脏，Trizol法提取各组肝脏总RNA，以日本血吸虫甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）为内参，Taqman探针qRT-PCR检测Sjp40 mRNA的表达；提取各组肝脏总蛋白，以硫酸铵盐析法和Protein G免疫亲和柱层析法纯化的抗Sjp40-McAb 9G7和抗弓形虫tSAG1-McAb Y3A8（对照抗体），western blot检测Sjp40蛋白的表达；制备肝脏石蜡切片，HE染色观察肝脏虫卵肉芽肿的形成与发展，进一步以免疫荧光技术进行Sjp40在肝脏沉积虫卵及其肉芽肿组织中的定位。

　　结果：日本血吸虫感染兔呈急性肝肉芽肿病变期的45 dpi肝脏沉积虫卵中Sjp40 mRNA水平显著高于29 dpi 尚未形成虫卵肉芽肿结节的肝脏沉积的未成熟虫卵（P<0.05），westernb blot 证实了Sjp40 蛋白在29 dpi 和45 dpi 兔肝脏中的表达。免疫荧光显示：Sjp40在29 dpi兔肝脏中定位于未成熟虫卵内，而45 dpi可见感染兔肝脏中沉积大量成簇内含毛蚴的成熟虫卵及其周围肉芽肿组织均有明显荧光。

　　结论：Sjp40在日本血吸虫感染兔肝脏沉积虫卵中的转录水平随虫卵发育成熟而显著增加，在感染兔急性肉芽肿病变期（45dpi）呈现由虫卵向其周围肉芽肿组织扩散现象，提示该分子在血吸虫肉芽肿形成与发展过程中具有重要作用。