动物造模,荧光PCR检测 中国实验动物信息网 2022-03-14 1180

　　目的： 建立多瘤病毒荧光定量PCR检测方法，并对裸鼹鼠中多瘤病毒感染情况进行调查。

　　方法： 比较NCBI中小鼠多瘤病毒（Genbank：NC_001515）的核酸序列，选择保守区域设计引物和探针，建立多瘤病毒的荧光定量PCR方法，对方法的敏感性和特异性进行验证。人工感染9只1日龄KM乳鼠，21 d后采集心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、盲肠内容物和血液等组织脏器，用建立的荧光PCR方法进行检测，验证方法在应用中的有效性，*后用该方法检测62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本。

　　结果： 建立的检测方法特异性好，在以多瘤病毒为模板时出现明显的荧光信号，以猴空泡病毒、小鼠K病毒、小鼠微小病毒和大鼠细小病毒H-1株为模板时无荧光信号出现；方法的*低检出限为100 copies/μL；人工感染小鼠的心、肝、脾、肺、肾和盲肠内容物中均检测到多瘤病毒核酸，其中肺组织中含量*高，脑、胸腺和血液中未检出；62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本经检测多瘤病毒为阴性。

　　结论： 建立的多瘤病毒荧光定量PCR方法可有效检测动物组织中的多瘤病毒，对裸鼹鼠自然感染多瘤病毒的调查为实验用裸鼹鼠微生物标准的制定提供了参考。