动物造模 中国实验动物信息网 2022-04-22 1460

　　目的：构建稳定过表达的miR-31转基因小鼠，检测其主要组织器官中miR-31的表达变化情况并对在体miR-31过表达的应用提供合格的工具鼠。

　　方法：使用Gateway cloning技术构建miR-31过表达载体，使用DNA显微注射技术将构建好的载体注入受精卵内，随后转移至假孕母鼠内，待其自然生产。将新生小鼠提取尾部DNA，PCR及琼脂糖凝胶电泳鉴定miR-31过表达阳性小鼠，筛选阳性小鼠并饲养繁殖。另取阳性小鼠，提取主要组织器官的miRNA并使用RT-PCR检测其miR-31的表达量。同时对比阳性小鼠和野生型小鼠神经系统中Nestin的表达和神经干细胞的数量。

　　结果：成功构建了miR-31过表达转基因小鼠，并在屏障环境下饲养繁殖至14代以上。各主要组织器官miR-31的表达均升高且稳定表达。阳性小鼠Nestin的表达和神经干细胞数量均高于野生型小鼠。

　　结论：通过使用Gateway cloning技术成功构建了miR-31过表达转基因小鼠，且在各代小鼠中miR-31的表达稳定，神经系统内的神经干细胞数量多于野生型小鼠，可为进一步研究miR-31过表达后在体内的功能和神经系统疾病的治疗提供良好的工具小鼠。