动物造模,基因敲除 中国实验动物信息网 2021-05-20 1901

　　目的：使用CRISPR/Cas9技术构建miRNA-29b1基因敲除小鼠。

　　方法：为miRNA-29b1基因设计sgRNA，sgRNA和Cas9，并在体外转录后显微注射到C57BL/6小鼠受精卵细胞中。小鼠出生后，对基因组DNA进行测序以鉴定基因型，同时收集小鼠心脏，肝脏，脾脏，肺和肾脏等器官，压碎后提取总RNA并进行miRNA通过实时PCR的表达分析这些器官中的-29b1。

　　结果：设计了一个20bp的miRNA-29b1sgRNA，并在Cas9中进行了体外转录，并在显微注射受精小鼠卵后获得了miRNA-29b1突变小鼠。测序结果表明，突变小鼠具有两种基因型。一个是10 bp缺失突变，另一个是22 bp缺失突变，插入突变为3 bp。与野生型小鼠相比，miRNA-29b1在基因突变小鼠的心脏，肝脏，脾脏，肺脏，肾脏和其他组织中的表达显着降低。

　　结论：使用CRISPR/Cas9技术成功构建了miRNA-29b1基因敲除小鼠。